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详细内容

使用制備液相色譜的工作流程和技巧

本文的重點(diǎn)是快速液相色譜和高效液相色譜。沒(méi)有一種完美的協(xié)議合適每一種別離目的。因此,建議為您的特定使用程序優(yōu)化辦法。經(jīng)過(guò)本文中列出的建議以及一些前期閱覽和測(cè)驗(yàn),您將輕松純化您正在尋找的組件。


        一、快速液相色譜純化


        運(yùn)用快速色譜法進(jìn)行純化的缺陷是該辦法固有的分辨率較低。快速液相色譜柱運(yùn)用更大的粒徑和柱容量,允許運(yùn)用更多的開(kāi)始資料,但以分辨率和純度為價(jià)值。假如化合物不需求更高的純度,或者假如下一步將進(jìn)行 HPLC,這或許是您的選擇。


        1、確認(rèn)溶劑體系


        樣品的純度(即混合物中有多少化合物)能夠運(yùn)用薄層色譜法 (TLC) 和組分的相對(duì)極性進(jìn)行定性測(cè)定。運(yùn)用 TLC 預(yù)先篩選*佳活動(dòng)相和固定相將節(jié)省時(shí)間和金錢(qián)。依據(jù)所運(yùn)用的溶劑,您或許需求在通風(fēng)柜中運(yùn)轉(zhuǎn)色譜柱,因?yàn)榇嬖跐撛诘奈kU(xiǎn)煙霧。


        2、確認(rèn)要運(yùn)用的列


        選擇別離柱時(shí)要考慮樣品量。色譜柱裝載量因粒徑和體積而異。一般來(lái)說(shuō),快速液相色譜柱的*大裝載量約為硅膠重量的 10%。較大的色譜柱能夠處理千克數(shù)量的色譜柱,但假如您沒(méi)有那么多開(kāi)始資料,那么您只會(huì)在硅膠和額定的溶劑上糟蹋金錢(qián)來(lái)運(yùn)轉(zhuǎn)這些大型色譜柱。在確認(rèn)液相剖析柱、基質(zhì)和溶劑后,您就能夠進(jìn)行快速別離了。


        3、液相色譜柱


        不管您是自己裝柱還是購(gòu)買一根預(yù)裝柱,按重量核算硅膠與化合物的比例(即硅膠:化合物)都將幫助您完成更有用的別離。恒譜生提供各種硅膠色譜柱,像uHPLCs高效液相C18-AQ剖析柱對(duì)親水性和極性化合物具有更強(qiáng)的保存才能和選擇性。


        假如包含了別離不太雜亂的溶液需求 30:1 到 50:1 的比率,但更雜亂的別離或許需求高達(dá) 120:1 的比率。手動(dòng)運(yùn)轉(zhuǎn)色譜柱時(shí),切勿讓溶劑管線低于硅膠,不然氣孔會(huì)在硅膠上形成看起來(lái)像裂縫的長(zhǎng)線。這大大降低了別離的功率。


         二、HPLC純化


       在 HPLC 上運(yùn)轉(zhuǎn)樣品適當(dāng)簡(jiǎn)略,因?yàn)樵诳焖僖合嗌V柱上預(yù)純化進(jìn)程中確認(rèn)的許多參數(shù)都能夠使用于此進(jìn)程。假如您在沒(méi)有預(yù)純化過(guò)程的情況下運(yùn)轉(zhuǎn) HPLC 別離,請(qǐng)考慮運(yùn)用上面列出的指南來(lái)開(kāi)發(fā)合適的 HPLC 辦法。運(yùn)用 HPLC 時(shí)的另一個(gè)考慮因素是核算的背壓。因?yàn)?HPLC 色譜柱的粒徑更小,可完成更高質(zhì)量的別離,因此這些體系往往在高壓條件下運(yùn)轉(zhuǎn),而閃蒸別離的壓力相對(duì)較低。運(yùn)用有關(guān)粒徑和形狀、色譜柱內(nèi)徑和溶劑規(guī)格的信息核算估計(jì)的背壓。


       與恒譜生技術(shù)支持專家進(jìn)行簡(jiǎn)略評(píng)論能夠節(jié)省您名貴的時(shí)間,并使您能夠在瞬間別離化合物!

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